使用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳、荧光放射自显影术及竞赛分析法检测苯唑西林对金葡球菌ATCC25923青霉素结合蛋白的亲和力。成果发现金葡球菌有5条青霉素结合蛋白,即PBP1、PBP2、PBP3、PBP4、PBP5,分子量规模41~87kD。苯唑西林主要与金葡球菌ATCC25923的PBP1和PBP2亲和力强,尤其是与PBP2亲和力很强。由此阐明金葡球菌的PBP1和PBP2是苯唑西林的最大的效果靶位。

　　青霉素结合蛋白(penicillin-bindingproteins,PBPs)是存在于细菌细胞内膜上一群能同青霉素和其他β-内酰胺类抗生素螯合的细菌蛋白质,便是抗生素效果的靶位点,抗生素与这些靶位点结合后,搅扰细菌细胞壁肽聚糖组成而导致细菌细胞溶解逝世。苯唑西林(oxacillin)对金葡球菌具有强壮的抗菌效果,对其效果机制的研讨,国内未见报导。本文使用微生物生化研讨办法,从金葡球菌规范株ATCC25923中提取细菌内膜蛋白,选用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)、荧光放射自显影术及竞赛分析法,研讨了苯唑西林与金葡球菌规范株ATCC25923细胞内膜青霉素结合蛋白的亲和力,讨论苯唑西林杀菌效果的分子学根底。

　　使用不接连的笔直电泳法,10%别离胶,5%浓缩胶,每孔加样50μl,电压75~120V,电流20~30mA,电泳4~6h(即溴酚蓝移至距底部约1cm处),凝胶用0.25%考马斯亮蓝R-250染色4h以上,然后用90%甲醇与10%冰乙酸脱色数次。

　　参照文献[4],将脱色的凝胶浸泡于适当于其20倍体积的二甲基亚砜(DMSO)中,1h后替换新鲜的DMSO再浸泡1h。然后凝胶浸泡于适当其5倍体积的22.2% PPO/DMSO中3h,继之置凝胶于蒸馏水中浸泡3h及含10%冰乙酸、1%甘油溶液中浸泡45 min。经凝胶枯燥器进行真空枯燥。将X光片进行预曝光,其意图是校对样品的放射量与X光片出现镜像的非线性联系。预曝光剂量X线s,即便X光片镜像强度添加0.25左右。枯燥的凝胶与经预曝光的X光片严密触摸,-50℃低温下曝光50~60d。曝光后的X光片在Kodak X光冲刷机中进行显影、定影处理。

　　选用试管二倍稀释法,37℃,孵育16~18h后调查成果,以肉眼调查无细菌成长的最低浓度为MIC。